BDDE ಕ್ರಾಸ್-ಲಿಂಕ್ಡ್ ಆಟೋಕ್ಲೇವ್‌ನಲ್ಲಿ ಹೊಸ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಉಪ-ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ಪತ್ತೆ

ನಿಮ್ಮ ಬ್ರೌಸರ್‌ನಲ್ಲಿ ಪ್ರಸ್ತುತ Javascript ಅನ್ನು ನಿಷ್ಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಲಾಗಿದೆ.ಜಾವಾಸ್ಕ್ರಿಪ್ಟ್ ಅನ್ನು ನಿಷ್ಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಿದಾಗ, ಈ ವೆಬ್‌ಸೈಟ್‌ನ ಕೆಲವು ಕಾರ್ಯಗಳು ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುವುದಿಲ್ಲ.
Javier Fidalgo, * Pierre-Antoine Deglesne, * Rodrigo Arroyo, * Lilian Sepúlveda, * Evgeniya Ranneva, Philipp Deprez Department of Science, Skin Tech Pharma Group, Castello D'Empúries, Catalonia, Spain * ಈ ಲೇಖಕರು ಈ ಕುರಿತು ಕೆಲವು ಕೆಲಸಗಳನ್ನು ಮಾಡಿದ್ದಾರೆ. ಕೊಡುಗೆ ಹಿನ್ನೆಲೆ: ಹೈಲುರಾನಿಕ್ ಆಮ್ಲ (HA) ಸೌಂದರ್ಯದ ಉದ್ದೇಶಗಳಿಗಾಗಿ ಚರ್ಮದ ಭರ್ತಿಸಾಮಾಗ್ರಿಗಳ ಉತ್ಪಾದನೆಯಲ್ಲಿ ನೈಸರ್ಗಿಕವಾಗಿ ಸಂಭವಿಸುವ ಪಾಲಿಸ್ಯಾಕರೈಡ್ ಆಗಿದೆ.ಮಾನವ ಅಂಗಾಂಶಗಳಲ್ಲಿ ಇದು ಹಲವಾರು ದಿನಗಳ ಅರ್ಧ-ಜೀವಿತಾವಧಿಯನ್ನು ಹೊಂದಿರುವುದರಿಂದ, HA- ಆಧಾರಿತ ಚರ್ಮದ ಭರ್ತಿಸಾಮಾಗ್ರಿಗಳನ್ನು ದೇಹದಲ್ಲಿ ತಮ್ಮ ಜೀವಿತಾವಧಿಯನ್ನು ವಿಸ್ತರಿಸಲು ರಾಸಾಯನಿಕವಾಗಿ ಮಾರ್ಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ.ವಾಣಿಜ್ಯ HA-ಆಧಾರಿತ ಭರ್ತಿಸಾಮಾಗ್ರಿಗಳಲ್ಲಿ ಅತ್ಯಂತ ಸಾಮಾನ್ಯವಾದ ಮಾರ್ಪಾಡು 1,4-ಬ್ಯುಟಾನೆಡಿಯೋಲ್ ಡಿಗ್ಲೈಸಿಡಿಲ್ ಈಥರ್ (BDDE) ಅನ್ನು HA ಸರಪಳಿಗಳನ್ನು ಕ್ರಾಸ್‌ಲಿಂಕ್ ಮಾಡಲು ಕ್ರಾಸ್‌ಲಿಂಕಿಂಗ್ ಏಜೆಂಟ್ ಆಗಿ ಬಳಸುವುದು.ಉಳಿದಿರುವ ಅಥವಾ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಿಸದ BDDE ಅನ್ನು ಪ್ರತಿ ಮಿಲಿಯನ್‌ಗೆ <2 ಭಾಗಗಳಲ್ಲಿ (ppm) ವಿಷಕಾರಿಯಲ್ಲವೆಂದು ಪರಿಗಣಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ;ಆದ್ದರಿಂದ, ರೋಗಿಯ ಸುರಕ್ಷತೆಯನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು ಅಂತಿಮ ಚರ್ಮದ ಫಿಲ್ಲರ್‌ನಲ್ಲಿ ಉಳಿದಿರುವ BDDE ಅನ್ನು ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಬೇಕು.ವಸ್ತುಗಳು ಮತ್ತು ವಿಧಾನಗಳು: ಲಿಕ್ವಿಡ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ ಮತ್ತು ಮಾಸ್ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಮೆಟ್ರಿ (LC-MS) ಅನ್ನು ಸಂಯೋಜಿಸುವ ಮೂಲಕ ಕ್ಷಾರೀಯ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ BDDE ಮತ್ತು HA ನಡುವಿನ ಅಡ್ಡ-ಸಂಪರ್ಕ ಕ್ರಿಯೆಯ ಉಪ-ಉತ್ಪನ್ನದ ಪತ್ತೆ ಮತ್ತು ಗುಣಲಕ್ಷಣವನ್ನು ಈ ಅಧ್ಯಯನವು ವಿವರಿಸುತ್ತದೆ.ಫಲಿತಾಂಶಗಳು: ವಿಭಿನ್ನ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳ ನಂತರ, HA-BDDE ಹೈಡ್ರೋಜೆಲ್ ಅನ್ನು ಸೋಂಕುರಹಿತಗೊಳಿಸಲು ಬಳಸುವ ಕ್ಷಾರೀಯ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳು ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿನ ತಾಪಮಾನವು ಈ ಹೊಸ ಉಪ-ಉತ್ಪನ್ನವಾದ "ಪ್ರೊಪಿಲೀನ್ ಗ್ಲೈಕಾಲ್-ತರಹದ" ಸಂಯುಕ್ತದ ರಚನೆಯನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಕಂಡುಬಂದಿದೆ.LC-MS ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯು ಉಪ-ಉತ್ಪನ್ನವು BDDE ಯಂತೆಯೇ ಅದೇ ಮೊನೊಐಸೋಟೋಪಿಕ್ ದ್ರವ್ಯರಾಶಿಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ವಿಭಿನ್ನ ಧಾರಣ ಸಮಯ (tR), ಮತ್ತು ವಿಭಿನ್ನ UV ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವ (λ=200 nm) ಮೋಡ್ ಅನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.BDDE ಗಿಂತ ಭಿನ್ನವಾಗಿ, ಅದೇ ಅಳತೆಯ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ, ಈ ಉಪ-ಉತ್ಪನ್ನವು 200 nm ನಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ಪತ್ತೆ ದರವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ ಎಂದು LC-MS ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯಲ್ಲಿ ಗಮನಿಸಲಾಗಿದೆ.ತೀರ್ಮಾನ: ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಈ ಹೊಸ ಸಂಯುಕ್ತದ ರಚನೆಯಲ್ಲಿ ಯಾವುದೇ ಎಪಾಕ್ಸೈಡ್ ಇಲ್ಲ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.ವಾಣಿಜ್ಯ ಉದ್ದೇಶಗಳಿಗಾಗಿ HA-BDDE ಹೈಡ್ರೋಜೆಲ್ (HA ಡರ್ಮಲ್ ಫಿಲ್ಲರ್) ಉತ್ಪಾದನೆಯಲ್ಲಿ ಕಂಡುಬರುವ ಈ ಹೊಸ ಉಪ-ಉತ್ಪನ್ನದ ಅಪಾಯವನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಲು ಚರ್ಚೆಯು ಮುಕ್ತವಾಗಿದೆ.ಕೀವರ್ಡ್ಗಳು: ಹೈಲುರಾನಿಕ್ ಆಮ್ಲ, HA ಡರ್ಮಲ್ ಫಿಲ್ಲರ್, ಕ್ರಾಸ್-ಲಿಂಕ್ಡ್ ಹೈಲುರಾನಿಕ್ ಆಮ್ಲ, BDDE, LC-MS ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ, BDDE ಉಪ-ಉತ್ಪನ್ನ.
ಹೈಲುರಾನಿಕ್ ಆಮ್ಲ (HA) ಆಧಾರಿತ ಫಿಲ್ಲರ್‌ಗಳು ಕಾಸ್ಮೆಟಿಕ್ ಉದ್ದೇಶಗಳಿಗಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುವ ಅತ್ಯಂತ ಸಾಮಾನ್ಯ ಮತ್ತು ಜನಪ್ರಿಯ ಚರ್ಮದ ಭರ್ತಿಸಾಮಾಗ್ರಿಗಳಾಗಿವೆ.1 ಈ ಡರ್ಮಲ್ ಫಿಲ್ಲರ್ ಒಂದು ಹೈಡ್ರೋಜೆಲ್ ಆಗಿದ್ದು, ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ >95% ನೀರು ಮತ್ತು 0.5-3% HA ಅನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ, ಇದು ಜೆಲ್ ತರಹದ ರಚನೆಯನ್ನು ನೀಡುತ್ತದೆ.2 HA ಪಾಲಿಸ್ಯಾಕರೈಡ್ ಮತ್ತು ಕಶೇರುಕಗಳ ಬಾಹ್ಯಕೋಶದ ಮ್ಯಾಟ್ರಿಕ್ಸ್‌ನ ಮುಖ್ಯ ಅಂಶವಾಗಿದೆ.ಪದಾರ್ಥಗಳಲ್ಲಿ ಒಂದು.ಇದು (1,4) -ಗ್ಲುಕುರೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲ-β (1,3)-N-ಅಸೆಟೈಲ್ಗ್ಲುಕೋಸಮೈನ್ (GlcNAc) ಪುನರಾವರ್ತಿತ ಡೈಸ್ಯಾಕರೈಡ್ ಘಟಕಗಳನ್ನು ಗ್ಲೈಕೋಸಿಡಿಕ್ ಬಂಧಗಳಿಂದ ಸಂಪರ್ಕಿಸುತ್ತದೆ.ಈ ಡೈಸ್ಯಾಕರೈಡ್ ಮಾದರಿಯು ಎಲ್ಲಾ ಜೀವಿಗಳಲ್ಲಿ ಒಂದೇ ಆಗಿರುತ್ತದೆ.ಕೆಲವು ಪ್ರೊಟೀನ್-ಆಧಾರಿತ ಭರ್ತಿಸಾಮಾಗ್ರಿಗಳೊಂದಿಗೆ (ಉದಾಹರಣೆಗೆ ಕಾಲಜನ್) ಹೋಲಿಸಿದರೆ, ಈ ಗುಣವು HA ಅನ್ನು ಹೆಚ್ಚು ಜೈವಿಕ ಹೊಂದಾಣಿಕೆಯ ಅಣುವನ್ನಾಗಿ ಮಾಡುತ್ತದೆ.ಈ ಭರ್ತಿಸಾಮಾಗ್ರಿಗಳು ರೋಗಿಯ ಪ್ರತಿರಕ್ಷಣಾ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಿಂದ ಗುರುತಿಸಬಹುದಾದ ಅಮೈನೊ ಆಸಿಡ್ ಸೀಕ್ವೆನ್ಸ್ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸಬಹುದು.
ಡರ್ಮಲ್ ಫಿಲ್ಲರ್ ಆಗಿ ಬಳಸಿದಾಗ, HA ಯ ಮುಖ್ಯ ಮಿತಿಯೆಂದರೆ ಹೈಲುರೊನಿಡೇಸ್ ಎಂಬ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಕುಟುಂಬದ ಕಿಣ್ವಗಳ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯಿಂದಾಗಿ ಅಂಗಾಂಶಗಳೊಳಗೆ ಅದರ ತ್ವರಿತ ವಹಿವಾಟು.ಇಲ್ಲಿಯವರೆಗೆ, HA ರಚನೆಯಲ್ಲಿ ಹಲವಾರು ರಾಸಾಯನಿಕ ಮಾರ್ಪಾಡುಗಳನ್ನು ಅಂಗಾಂಶಗಳಲ್ಲಿ HA ನ ಅರ್ಧ-ಜೀವಿತಾವಧಿಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಲು ವಿವರಿಸಲಾಗಿದೆ.3 ಈ ಹೆಚ್ಚಿನ ಮಾರ್ಪಾಡುಗಳು HA ಸರಪಳಿಗಳನ್ನು ಅಡ್ಡ-ಲಿಂಕ್ ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ ಪಾಲಿಸ್ಯಾಕರೈಡ್ ಪಾಲಿಮರ್‌ಗಳಿಗೆ ಹೈಲುರೊನಿಡೇಸ್‌ನ ಪ್ರವೇಶವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಲು ಪ್ರಯತ್ನಿಸುತ್ತವೆ.ಆದ್ದರಿಂದ, ಸೇತುವೆಗಳ ರಚನೆ ಮತ್ತು HA ರಚನೆ ಮತ್ತು ಕ್ರಾಸ್-ಲಿಂಕಿಂಗ್ ಏಜೆಂಟ್ ನಡುವಿನ ಇಂಟರ್ಮೋಲಿಕ್ಯುಲರ್ ಕೋವೆಲೆಂಟ್ ಬಂಧಗಳಿಂದಾಗಿ, ಕ್ರಾಸ್-ಲಿಂಕ್ಡ್ HA ಹೈಡ್ರೋಜೆಲ್ ನೈಸರ್ಗಿಕ HA ಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ವಿರೋಧಿ ಕಿಣ್ವದ ಅವನತಿ ಉತ್ಪನ್ನಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುತ್ತದೆ.4-6
ಇಲ್ಲಿಯವರೆಗೆ, ಕ್ರಾಸ್‌ಲಿಂಕ್ಡ್ HA ಉತ್ಪಾದಿಸಲು ಬಳಸುವ ರಾಸಾಯನಿಕ ಕ್ರಾಸ್‌ಲಿಂಕಿಂಗ್ ಏಜೆಂಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಮೆಥಾಕ್ರಿಲಾಮೈಡ್, 7 ಹೈಡ್ರಾಜೈಡ್, 8 ಕಾರ್ಬೋಡೈಮೈಡ್, 9 ಡಿವಿನೈಲ್ ಸಲ್ಫೋನ್, 1,4-ಬ್ಯುಟಾನೆಡಿಯೋಲ್ ಡಿಗ್ಲೈಸಿಡಿಲ್ ಈಥರ್ (BDDE) ಮತ್ತು ಪಾಲಿ(ಎಥಿಲೀನ್ ಗ್ಲೈಕಾಲ್) ಡಿಗ್ಲೈಸಿಡಿಲ್ ಈಥರ್ ಸೇರಿವೆ.10 ,11 BDDE ಪ್ರಸ್ತುತ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಬಳಸುವ ಕ್ರಾಸ್‌ಲಿಂಕಿಂಗ್ ಏಜೆಂಟ್.ಈ ರೀತಿಯ ಹೈಡ್ರೋಜೆಲ್‌ಗಳು ದಶಕಗಳಿಂದ ಸುರಕ್ಷಿತವೆಂದು ಸಾಬೀತಾಗಿದ್ದರೂ, ಬಳಸಿದ ಕ್ರಾಸ್‌ಲಿಂಕಿಂಗ್ ಏಜೆಂಟ್‌ಗಳು ಸೈಟೊಟಾಕ್ಸಿಕ್ ಮತ್ತು ಕೆಲವು ಸಂದರ್ಭಗಳಲ್ಲಿ ಮ್ಯುಟಾಜೆನಿಕ್ ಆಗಿರುವ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕ ಕಾರಕಗಳಾಗಿವೆ.12 ಆದ್ದರಿಂದ, ಅಂತಿಮ ಹೈಡ್ರೋಜೆಲ್‌ನಲ್ಲಿ ಅವುಗಳ ಉಳಿಕೆಯ ಅಂಶವು ಅಧಿಕವಾಗಿರಬೇಕು.ಉಳಿದ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಮಿಲಿಯನ್‌ಗೆ 2 ಭಾಗಗಳಿಗಿಂತ ಕಡಿಮೆಯಿರುವಾಗ (ppm) BDDE ಅನ್ನು ಸುರಕ್ಷಿತವೆಂದು ಪರಿಗಣಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.4
ಗ್ಯಾಸ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ, ಮಾಸ್ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಮೆಟ್ರಿ (MS), ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯರ್ ಮ್ಯಾಗ್ನೆಟಿಕ್ ರೆಸೋನೆನ್ಸ್ (NMR) ಫ್ಲೋರೊಸೆನ್ಸ್ ಮಾಪನ ವಿಧಾನಗಳಂತಹ ಗ್ಯಾಸ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ, ಸೈಜ್ ಎಕ್ಸ್‌ಕ್ಲೂಷನ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ ಮುಂತಾದ ಕಡಿಮೆ-ಅವಶೇಷ BDDE ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ಹಲವಾರು ವಿಧಾನಗಳಿವೆ, HA ಹೈಡ್ರೋಜೆಲ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಕ್ರಾಸ್-ಲಿಂಕಿಂಗ್ ಪದವಿ ಮತ್ತು ಪರ್ಯಾಯ ಸ್ಥಾನ. ಡಯೋಡ್ ಅರೇ ಕಪಲ್ಡ್ ಹೈ ಪರ್ಫಾರ್ಮೆನ್ಸ್ ಲಿಕ್ವಿಡ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ (HPLC).13-17 ಈ ಅಧ್ಯಯನವು ಕ್ಷಾರೀಯ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ BDDE ಮತ್ತು HA ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯಿಂದ ಉತ್ಪತ್ತಿಯಾಗುವ ಅಂತಿಮ ಅಡ್ಡ-ಸಂಯೋಜಿತ HA ಹೈಡ್ರೋಜೆಲ್‌ನಲ್ಲಿ ಉಪ-ಉತ್ಪನ್ನದ ಪತ್ತೆ ಮತ್ತು ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ವಿವರಿಸುತ್ತದೆ.HPLC ಮತ್ತು ಲಿಕ್ವಿಡ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ-ಮಾಸ್ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಮೆಟ್ರಿ (LC-MS ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ).BDDE ಯ ಈ ಉಪ-ಉತ್ಪನ್ನದ ವಿಷತ್ವವು ತಿಳಿದಿಲ್ಲವಾದ್ದರಿಂದ, ಅಂತಿಮ ಉತ್ಪನ್ನದಲ್ಲಿ BDDE ಯಲ್ಲಿ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ನಿರ್ವಹಿಸುವ ವಿಧಾನದಂತೆಯೇ ಅದರ ಶೇಷ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಬೇಕು ಎಂದು ನಾವು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡುತ್ತೇವೆ.
HA (Shiseido Co., Ltd., Tokyo, Japan) ಪಡೆದ ಸೋಡಿಯಂ ಉಪ್ಪು ~1,368,000 Da (ಲಾರೆಂಟ್ ವಿಧಾನ) 18 ರ ಆಣ್ವಿಕ ತೂಕ ಮತ್ತು 2.20 m3/kg ನ ಆಂತರಿಕ ಸ್ನಿಗ್ಧತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.ಕ್ರಾಸ್‌ಲಿಂಕಿಂಗ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಾಗಿ, BDDE (≥95%) ಅನ್ನು ಸಿಗ್ಮಾ-ಆಲ್ಡ್ರಿಚ್ ಕಂ. (ಸೇಂಟ್ ಲೂಯಿಸ್, MO, USA) ನಿಂದ ಖರೀದಿಸಲಾಗಿದೆ.ಸಿಗ್ಮಾ-ಆಲ್ಡ್ರಿಚ್ ಕಂಪನಿಯಿಂದ pH 7.4 ರೊಂದಿಗಿನ ಫಾಸ್ಫೇಟ್ ಬಫರ್ಡ್ ಸಲೈನ್ ಅನ್ನು ಖರೀದಿಸಲಾಗಿದೆ.LC-MS ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯಲ್ಲಿ ಬಳಸಲಾದ ಎಲ್ಲಾ ದ್ರಾವಕಗಳು, ಅಸಿಟೋನೈಟ್ರೈಲ್ ಮತ್ತು ನೀರನ್ನು HPLC ದರ್ಜೆಯ ಗುಣಮಟ್ಟದಿಂದ ಖರೀದಿಸಲಾಗಿದೆ.ಫಾರ್ಮಿಕ್ ಆಮ್ಲವನ್ನು (98%) ಕಾರಕ ದರ್ಜೆಯಾಗಿ ಖರೀದಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.
ಎಲ್ಲಾ ಪ್ರಯೋಗಗಳನ್ನು UPLC ಅಕ್ವಿಟಿ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಲ್ಲಿ (ವಾಟರ್ಸ್, ಮಿಲ್ಫೋರ್ಡ್, MA, USA) ನಡೆಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಸ್ಪ್ರೇ ಅಯಾನೀಕರಣ ಮೂಲ (AB SCIEX, ಫ್ರೇಮಿಂಗ್ಹ್ಯಾಮ್, MA, USA) ಹೊಂದಿದ API 3000 ಟ್ರಿಪಲ್ ಕ್ವಾಡ್ರುಪೋಲ್ ಮಾಸ್ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಮೀಟರ್‌ಗೆ ಸಂಪರ್ಕಿಸಲಾಗಿದೆ.
1% ಕ್ಷಾರ (ಸೋಡಿಯಂ ಹೈಡ್ರಾಕ್ಸೈಡ್, NaOH) ಉಪಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ 10% (w/w) ಸೋಡಿಯಂ ಹೈಲುರೊನೇಟ್ (NaHA) ದ್ರಾವಣಕ್ಕೆ 198 mg BDDE ಅನ್ನು ಸೇರಿಸುವ ಮೂಲಕ ಅಡ್ಡ-ಸಂಯೋಜಿತ HA ಹೈಡ್ರೋಜೆಲ್‌ಗಳ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ಪ್ರಾರಂಭಿಸಲಾಯಿತು.ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಮಿಶ್ರಣದಲ್ಲಿ ಅಂತಿಮ BDDE ಸಾಂದ್ರತೆಯು 9.9 mg/mL (0.049 mM) ಆಗಿತ್ತು.ನಂತರ, ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮತ್ತು ಏಕರೂಪಗೊಳಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು 4 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ 45 ° C ನಲ್ಲಿ ಮುಂದುವರೆಯಲು ಅನುಮತಿಸಲಾಗಿದೆ.19 ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ pH ಅನ್ನು ~12 ನಲ್ಲಿ ನಿರ್ವಹಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.
ಅದರ ನಂತರ, ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು ನೀರಿನಿಂದ ತೊಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಅಂತಿಮ HA-BDDE ಹೈಡ್ರೋಜೆಲ್ ಅನ್ನು 10 ರಿಂದ 25 mg/mL ನ HA ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಸಾಧಿಸಲು PBS ಬಫರ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಫಿಲ್ಟರ್ ಮಾಡಿ ಮತ್ತು ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಅಂತಿಮ pH 7.4.ಉತ್ಪತ್ತಿಯಾದ ಕ್ರಾಸ್-ಲಿಂಕ್ಡ್ HA ಹೈಡ್ರೋಜೆಲ್‌ಗಳನ್ನು ಕ್ರಿಮಿನಾಶಕಗೊಳಿಸಲು, ಈ ಎಲ್ಲಾ ಹೈಡ್ರೋಜೆಲ್‌ಗಳನ್ನು ಆಟೋಕ್ಲೇವ್ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ (20 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 120 ° C).ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ BDDE-HA ಹೈಡ್ರೋಜೆಲ್ ಅನ್ನು ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯವರೆಗೆ 4 ° C ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.
ಕ್ರಾಸ್-ಲಿಂಕ್ಡ್ HA ಉತ್ಪನ್ನದಲ್ಲಿ ಇರುವ BDDE ಅನ್ನು ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲು, 240 mg ಮಾದರಿಯನ್ನು ತೂಕ ಮತ್ತು ಮಧ್ಯದ ರಂಧ್ರಕ್ಕೆ ಪರಿಚಯಿಸಲಾಯಿತು (Microcon®; Merck Millipore, Billerica, MA, USA; ಪರಿಮಾಣ 0.5 mL) ಮತ್ತು ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ 10,000 rpm ನಲ್ಲಿ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿಗೊಳಿಸಲಾಯಿತು. 10 ನಿಮಿಷ.ಒಟ್ಟು 20 µL ಪುಲ್-ಡೌನ್ ದ್ರವವನ್ನು ಸಂಗ್ರಹಿಸಿ ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗಿದೆ.
ಕ್ಷಾರೀಯ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ (1%, 0.1% ಮತ್ತು 0.01% NaOH) BDDE ಮಾನದಂಡವನ್ನು (ಸಿಗ್ಮಾ-ಆಲ್ಡ್ರಿಚ್ ಕೋ) ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲು, ಈ ಕೆಳಗಿನ ಷರತ್ತುಗಳನ್ನು ಪೂರೈಸಿದರೆ, ದ್ರವ ಮಾದರಿಯು 1:10, 1:100, ಅಥವಾ ವರೆಗೆ 1:1,000,000 ಅಗತ್ಯವಿದ್ದರೆ, ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಾಗಿ MilliQ ಡಿಯೋನೈಸ್ಡ್ ನೀರನ್ನು ಬಳಸಿ.
ಕ್ರಾಸ್-ಲಿಂಕಿಂಗ್ ರಿಯಾಕ್ಷನ್‌ನಲ್ಲಿ (HA 2%, H2O, 1% NaOH, ಮತ್ತು 0.049 mM BDDE) ಬಳಸಿದ ಆರಂಭಿಕ ವಸ್ತುಗಳಿಗೆ, ಈ ವಸ್ತುಗಳಿಂದ ತಯಾರಿಸಲಾದ ಪ್ರತಿ ಮಾದರಿಯ 1 mL ಅನ್ನು ಅದೇ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗಿದೆ.
ಅಯಾನು ನಕ್ಷೆಯಲ್ಲಿ ಗೋಚರಿಸುವ ಶಿಖರಗಳ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು, 20 µL ಮಾದರಿಗೆ 10 µL 100 ppb BDDE ಪ್ರಮಾಣಿತ ಪರಿಹಾರವನ್ನು (ಸಿಗ್ಮಾ-ಆಲ್ಡ್ರಿಚ್ ಕೋ) ಸೇರಿಸಲಾಯಿತು.ಈ ಸಂದರ್ಭದಲ್ಲಿ, ಪ್ರತಿ ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿನ ಮಾನದಂಡದ ಅಂತಿಮ ಸಾಂದ್ರತೆಯು 37 ppb ಆಗಿದೆ.
ಮೊದಲಿಗೆ, 990 μL MilliQ ನೀರಿನಿಂದ (ಸಾಂದ್ರತೆ 1.1 g/mL) 10 μL ಸ್ಟ್ಯಾಂಡರ್ಡ್ BDDE (ಸಿಗ್ಮಾ-ಆಲ್ಡ್ರಿಚ್ Co) ಅನ್ನು ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸುವ ಮೂಲಕ 11,000 mg/L (11,000 ppm) ಸಾಂದ್ರತೆಯೊಂದಿಗೆ BDDE ಸ್ಟಾಕ್ ಪರಿಹಾರವನ್ನು ತಯಾರಿಸಿ.110 µg/L (110 ppb) BDDE ಪರಿಹಾರವನ್ನು ಮಧ್ಯಂತರ ಪ್ರಮಾಣಿತ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯಾಗಿ ತಯಾರಿಸಲು ಈ ಪರಿಹಾರವನ್ನು ಬಳಸಿ.ನಂತರ, 75, 50, 25, 10, ಮತ್ತು 1 ppb ನ ಅಪೇಕ್ಷಿತ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಸಾಧಿಸಲು ಮಧ್ಯಂತರ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಹಲವಾರು ಬಾರಿ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸುವ ಮೂಲಕ ಪ್ರಮಾಣಿತ ಕರ್ವ್ ಅನ್ನು ತಯಾರಿಸಲು ಮಧ್ಯಂತರ BDDE ಪ್ರಮಾಣಿತ ಡೈಲ್ಯೂಯೆಂಟ್ (110 ppb) ಅನ್ನು ಬಳಸಿ.ಚಿತ್ರ 1 ರಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಿರುವಂತೆ, 1.1 ರಿಂದ 110 ppb ವರೆಗಿನ BDDE ಪ್ರಮಾಣಿತ ಕರ್ವ್ ಉತ್ತಮ ರೇಖಾತ್ಮಕತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ (R2>0.99).ನಾಲ್ಕು ಸ್ವತಂತ್ರ ಪ್ರಯೋಗಗಳಲ್ಲಿ ಪ್ರಮಾಣಿತ ವಕ್ರರೇಖೆಯನ್ನು ಪುನರಾವರ್ತಿಸಲಾಯಿತು.
ಚಿತ್ರ 1 LC-MS ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯಿಂದ ಪಡೆದ BDDE ಪ್ರಮಾಣಿತ ಮಾಪನಾಂಕ ನಿರ್ಣಯ ಕರ್ವ್, ಇದರಲ್ಲಿ ಉತ್ತಮ ಪರಸ್ಪರ ಸಂಬಂಧವನ್ನು ಗಮನಿಸಲಾಗಿದೆ (R2>0.99).
ಸಂಕ್ಷೇಪಣಗಳು: BDDE, 1,4-ಬ್ಯುಟಾನೆಡಿಯೋಲ್ ಡಿಗ್ಲೈಸಿಡಿಲ್ ಈಥರ್;LC-MS, ಲಿಕ್ವಿಡ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ ಮತ್ತು ಮಾಸ್ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಮೆಟ್ರಿ.
ಕ್ರಾಸ್-ಲಿಂಕ್ಡ್ HA ಮತ್ತು BDDE ಮಾನದಂಡಗಳಲ್ಲಿ ಇರುವ BDDE ಮಾನದಂಡಗಳನ್ನು ಗುರುತಿಸಲು ಮತ್ತು ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಲು, LC-MS ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ಬಳಸಲಾಗಿದೆ.
ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೊಗ್ರಾಫಿಕ್ ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆಯನ್ನು LUNA 2.5 µm C18(2)-HST ಕಾಲಮ್‌ನಲ್ಲಿ ಸಾಧಿಸಲಾಗಿದೆ (50×2.0 mm2; ಫಿನೊಮೆನೆಕ್ಸ್, ಟಾರೆನ್ಸ್, CA, USA) ಮತ್ತು ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ (25 ° C) ಇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಮೊಬೈಲ್ ಹಂತವು 0.1% ಫಾರ್ಮಿಕ್ ಆಮ್ಲವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಅಸಿಟೋನೈಟ್ರೈಲ್ (ದ್ರಾವಕ A) ಮತ್ತು ನೀರು (ದ್ರಾವಕ B) ಅನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ.ಮೊಬೈಲ್ ಹಂತವನ್ನು ಗ್ರೇಡಿಯಂಟ್ ಎಲುಷನ್ ಮೂಲಕ ಹೊರಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ.ಗ್ರೇಡಿಯಂಟ್ ಈ ಕೆಳಗಿನಂತಿರುತ್ತದೆ: 0 ನಿಮಿಷಗಳು, 2% A;1 ನಿಮಿಷ, 2% ಎ;6 ನಿಮಿಷಗಳು, 98% A;7 ನಿಮಿಷಗಳು, 98% A;7.1 ನಿಮಿಷಗಳು, 2% A;10 ನಿಮಿಷಗಳು, 2% A. ಚಾಲನೆಯಲ್ಲಿರುವ ಸಮಯ 10 ನಿಮಿಷಗಳು ಮತ್ತು ಇಂಜೆಕ್ಷನ್ ಪರಿಮಾಣವು 20 µL ಆಗಿದೆ.BDDE ಯ ಧಾರಣ ಸಮಯವು ಸುಮಾರು 3.48 ನಿಮಿಷಗಳು (ಪ್ರಯೋಗಗಳ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ 3.43 ರಿಂದ 4.14 ನಿಮಿಷಗಳವರೆಗೆ).LC-MS ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಾಗಿ ಮೊಬೈಲ್ ಹಂತವನ್ನು 0.25 mL/min ನ ಹರಿವಿನ ದರದಲ್ಲಿ ಪಂಪ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.
MS ನಿಂದ BDDE ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ ಮತ್ತು ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣಕ್ಕಾಗಿ, UPLC ಸಿಸ್ಟಮ್ (ವಾಟರ್ಸ್) ಅನ್ನು API 3000 ಟ್ರಿಪಲ್ ಕ್ವಾಡ್ರುಪೋಲ್ ಮಾಸ್ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಮೀಟರ್ (AB SCIEX) ಜೊತೆಗೆ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಸ್ಪ್ರೇ ಅಯಾನೀಕರಣ ಮೂಲದೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ಧನಾತ್ಮಕ ಅಯಾನು ಮೋಡ್‌ನಲ್ಲಿ (ESI+) ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ.
BDDE ಯಲ್ಲಿ ನಡೆಸಿದ ಅಯಾನು ತುಣುಕು ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಪ್ರಕಾರ, ಹೆಚ್ಚಿನ ತೀವ್ರತೆಯ ತುಣುಕನ್ನು 129.1 Da (ಚಿತ್ರ 6) ಗೆ ಅನುಗುಣವಾದ ತುಣುಕು ಎಂದು ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಯಿತು.ಆದ್ದರಿಂದ, ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣಕ್ಕಾಗಿ ಬಹು-ಅಯಾನ್ ಮಾನಿಟರಿಂಗ್ ಮೋಡ್‌ನಲ್ಲಿ (MIM), BDDE ಯ ದ್ರವ್ಯರಾಶಿ ಪರಿವರ್ತನೆ (ದ್ರವ್ಯರಾಶಿ-ಚಾರ್ಜ್ ಅನುಪಾತ [m/z]) 203.3/129.1 Da ಆಗಿದೆ.ಇದು LC-MS ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಾಗಿ ಪೂರ್ಣ ಸ್ಕ್ಯಾನ್ (FS) ಮೋಡ್ ಮತ್ತು ಉತ್ಪನ್ನ ಅಯಾನ್ ಸ್ಕ್ಯಾನ್ (PIS) ಮೋಡ್ ಅನ್ನು ಸಹ ಬಳಸುತ್ತದೆ.
ವಿಧಾನದ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯನ್ನು ಪರಿಶೀಲಿಸಲು, ಖಾಲಿ ಮಾದರಿಯನ್ನು (ಆರಂಭಿಕ ಮೊಬೈಲ್ ಹಂತ) ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗಿದೆ.203.3/129.1 Da ನ ಸಾಮೂಹಿಕ ಪರಿವರ್ತನೆಯೊಂದಿಗೆ ಖಾಲಿ ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿ ಯಾವುದೇ ಸಿಗ್ನಲ್ ಪತ್ತೆಯಾಗಿಲ್ಲ.ಪ್ರಯೋಗದ ಪುನರಾವರ್ತನೆಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದಂತೆ, 55 ppb (ಮಾಪನಾಂಕ ನಿರ್ಣಯದ ರೇಖೆಯ ಮಧ್ಯದಲ್ಲಿ) 10 ಪ್ರಮಾಣಿತ ಚುಚ್ಚುಮದ್ದುಗಳನ್ನು ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗಿದೆ, ಇದರ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ಉಳಿದಿರುವ ಪ್ರಮಾಣಿತ ವಿಚಲನ (RSD) <5% (ಡೇಟಾವನ್ನು ತೋರಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ).
ಉಳಿದಿರುವ BDDE ವಿಷಯವನ್ನು ಎಂಟು ವಿಭಿನ್ನ ಆಟೋಕ್ಲೇವ್ಡ್ BDDE ಕ್ರಾಸ್-ಲಿಂಕ್ಡ್ HA ಹೈಡ್ರೋಜೆಲ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಲಾಗಿದೆ, ಇದು ನಾಲ್ಕು ಸ್ವತಂತ್ರ ಪ್ರಯೋಗಗಳಿಗೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿರುತ್ತದೆ."ವಸ್ತುಗಳು ಮತ್ತು ವಿಧಾನಗಳು" ವಿಭಾಗದಲ್ಲಿ ವಿವರಿಸಿದಂತೆ, BDDE ಪ್ರಮಾಣಿತ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯ ರಿಗ್ರೆಷನ್ ಕರ್ವ್‌ನ ಸರಾಸರಿ ಮೌಲ್ಯದಿಂದ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣವನ್ನು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು BDDE ಸಮೂಹ ಪರಿವರ್ತನೆಯಲ್ಲಿ 203.3/129.1 Da, ಧಾರಣದೊಂದಿಗೆ ಪತ್ತೆಯಾದ ಅನನ್ಯ ಶಿಖರಕ್ಕೆ ಅನುರೂಪವಾಗಿದೆ. 3.43 ರಿಂದ 4.14 ನಿಮಿಷಗಳ ಸಮಯ ಕಾಯುತ್ತಿಲ್ಲ.ಚಿತ್ರ 2 10 ppb BDDE ಉಲ್ಲೇಖ ಮಾನದಂಡದ ಉದಾಹರಣೆ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಾಮ್ ಅನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ.ಎಂಟು ವಿಭಿನ್ನ ಹೈಡ್ರೋಜೆಲ್‌ಗಳ ಉಳಿದ BDDE ವಿಷಯವನ್ನು ಕೋಷ್ಟಕ 1 ಸಾರಾಂಶಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ.ಮೌಲ್ಯದ ವ್ಯಾಪ್ತಿಯು 1 ರಿಂದ 2.46 ppb ಆಗಿದೆ.ಆದ್ದರಿಂದ, ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿ ಉಳಿದಿರುವ BDDE ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಮಾನವ ಬಳಕೆಗೆ ಸ್ವೀಕಾರಾರ್ಹವಾಗಿದೆ (<2 ppm).
ಚಿತ್ರ 2 203.30/129.10 Da (ಧನಾತ್ಮಕ MRM ಮೋಡ್‌ನಲ್ಲಿ) LC-MS ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯಿಂದ ಪಡೆದ 10 ppb BDDE ರೆಫರೆನ್ಸ್ ಸ್ಟ್ಯಾಂಡರ್ಡ್ (ಸಿಗ್ಮಾ-ಆಲ್ಡ್ರಿಚ್ Co), MS (m/z) ಪರಿವರ್ತನೆಯ ಅಯಾನ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಾಮ್.
ಸಂಕ್ಷೇಪಣಗಳು: BDDE, 1,4-ಬ್ಯುಟಾನೆಡಿಯೋಲ್ ಡಿಗ್ಲೈಸಿಡಿಲ್ ಈಥರ್;LC-MS, ಲಿಕ್ವಿಡ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ ಮತ್ತು ಮಾಸ್ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಮೆಟ್ರಿ;MRM, ಬಹು ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಮೇಲ್ವಿಚಾರಣೆ;MS, ಸಮೂಹ;m/z, ಮಾಸ್-ಟು-ಚಾರ್ಜ್ ಅನುಪಾತ.
ಗಮನಿಸಿ: 1-8 ಮಾದರಿಗಳು ಆಟೋಕ್ಲೇವ್ಡ್ BDDE ಕ್ರಾಸ್-ಲಿಂಕ್ಡ್ HA ಹೈಡ್ರೋಜೆಲ್ಗಳಾಗಿವೆ.ಹೈಡ್ರೋಜೆಲ್‌ನಲ್ಲಿ BDDE ಯ ಉಳಿದ ಪ್ರಮಾಣ ಮತ್ತು BDDE ಧಾರಣ ಸಮಯದ ಗರಿಷ್ಠವನ್ನು ಸಹ ವರದಿ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.ಅಂತಿಮವಾಗಿ, ವಿಭಿನ್ನ ಧಾರಣ ಸಮಯಗಳೊಂದಿಗೆ ಹೊಸ ಶಿಖರಗಳ ಅಸ್ತಿತ್ವವನ್ನು ಸಹ ವರದಿ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.
ಸಂಕ್ಷೇಪಣಗಳು: BDDE, 1,4-ಬ್ಯುಟಾನೆಡಿಯೋಲ್ ಡಿಗ್ಲೈಸಿಡಿಲ್ ಈಥರ್;HA, ಹೈಲುರಾನಿಕ್ ಆಮ್ಲ;MRM, ಬಹು ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಮೇಲ್ವಿಚಾರಣೆ;ಟಿಆರ್, ಧಾರಣ ಸಮಯ;LC-MS, ಲಿಕ್ವಿಡ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ ಮತ್ತು ಮಾಸ್ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಮೆಟ್ರಿ;RRT, ಸಂಬಂಧಿತ ಧಾರಣ ಸಮಯ.
ಆಶ್ಚರ್ಯಕರವಾಗಿ, LC-MS ಅಯಾನ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಾಮ್‌ನ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯು ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಿದ ಎಲ್ಲಾ ಆಟೋಕ್ಲೇವ್ಡ್ ಕ್ರಾಸ್-ಲಿಂಕ್ಡ್ HA ಹೈಡ್ರೋಜೆಲ್ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಆಧರಿಸಿ, 2.73 ರಿಂದ 3.29 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಡಿಮೆ ಧಾರಣ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚುವರಿ ಗರಿಷ್ಠತೆಯನ್ನು ತೋರಿಸಿದೆ.ಉದಾಹರಣೆಗೆ, ಚಿತ್ರ 3 ಕ್ರಾಸ್-ಲಿಂಕ್ಡ್ HA ಮಾದರಿಯ ಅಯಾನ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಾಮ್ ಅನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ, ಅಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚುವರಿ ಗರಿಷ್ಠವು ಸರಿಸುಮಾರು 2.71 ನಿಮಿಷಗಳ ವಿಭಿನ್ನ ಧಾರಣ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಕಾಣಿಸಿಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ.ಹೊಸದಾಗಿ ಗಮನಿಸಿದ ಶಿಖರ ಮತ್ತು BDDE ಯಿಂದ ಗರಿಷ್ಠ ನಡುವಿನ ಸಂಬಂಧಿತ ಧಾರಣ ಸಮಯ (RRT) 0.79 (ಕೋಷ್ಟಕ 1) ಎಂದು ಕಂಡುಬಂದಿದೆ.LC-MS ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯಲ್ಲಿ ಬಳಸಲಾದ C18 ಕಾಲಮ್‌ನಲ್ಲಿ ಹೊಸದಾಗಿ ಗಮನಿಸಿದ ಶಿಖರವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಉಳಿಸಿಕೊಳ್ಳಲಾಗಿದೆ ಎಂದು ನಮಗೆ ತಿಳಿದಿರುವುದರಿಂದ, ಹೊಸ ಶಿಖರವು BDDE ಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಧ್ರುವೀಯ ಸಂಯುಕ್ತಕ್ಕೆ ಹೊಂದಿಕೆಯಾಗಬಹುದು.
ಚಿತ್ರ 3 LC-MS ನಿಂದ ಪಡೆದ ಕ್ರಾಸ್-ಲಿಂಕ್ಡ್ HA ಹೈಡ್ರೋಜೆಲ್ ಮಾದರಿಯ ಅಯಾನ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಾಮ್ (MRM ಸಮೂಹ ಪರಿವರ್ತನೆ 203.3/129.0 Da).
ಸಂಕ್ಷೇಪಣಗಳು: HA, ಹೈಲುರಾನಿಕ್ ಆಮ್ಲ;LC-MS, ಲಿಕ್ವಿಡ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ ಮತ್ತು ಮಾಸ್ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಮೆಟ್ರಿ;MRM, ಬಹು ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಮೇಲ್ವಿಚಾರಣೆ;RRT, ಸಂಬಂಧಿತ ಧಾರಣ ಸಮಯ;ಟಿಆರ್, ಧಾರಣ ಸಮಯ.
ಗಮನಿಸಿದ ಹೊಸ ಶಿಖರಗಳು ಮೂಲತಃ ಬಳಸಿದ ಕಚ್ಚಾ ವಸ್ತುಗಳಲ್ಲಿರುವ ಮಾಲಿನ್ಯಕಾರಕಗಳಾಗಿರಬಹುದು ಎಂಬ ಸಾಧ್ಯತೆಯನ್ನು ತಳ್ಳಿಹಾಕಲು, ಈ ಕಚ್ಚಾ ವಸ್ತುಗಳನ್ನು ಅದೇ LC-MS ವಿಶ್ಲೇಷಣಾ ವಿಧಾನವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗಿದೆ.ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಿದ ಆರಂಭಿಕ ಸಾಮಗ್ರಿಗಳಲ್ಲಿ ನೀರು, ನೀರಿನಲ್ಲಿ 2% NaHA, ನೀರಿನಲ್ಲಿ 1% NaOH, ಮತ್ತು ಅಡ್ಡ-ಸಂಪರ್ಕ ಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಬಳಸುವ ಅದೇ ಸಾಂದ್ರತೆಯಲ್ಲಿ BDDE ಸೇರಿವೆ.ಬಳಸಿದ ಆರಂಭಿಕ ವಸ್ತುವಿನ ಅಯಾನ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಾಮ್ ಯಾವುದೇ ಸಂಯುಕ್ತ ಅಥವಾ ಗರಿಷ್ಠವನ್ನು ತೋರಿಸಲಿಲ್ಲ, ಮತ್ತು ಅದರ ಧಾರಣ ಸಮಯವು ಗಮನಿಸಿದ ಹೊಸ ಶಿಖರಕ್ಕೆ ಅನುರೂಪವಾಗಿದೆ.ಆರಂಭಿಕ ವಸ್ತುವು ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಕ್ಕೆ ಅಡ್ಡಿಪಡಿಸುವ ಯಾವುದೇ ಸಂಯುಕ್ತಗಳು ಅಥವಾ ಪದಾರ್ಥಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರಬಹುದು ಎಂಬ ಕಲ್ಪನೆಯನ್ನು ಈ ಸತ್ಯವು ತಿರಸ್ಕರಿಸುತ್ತದೆ, ಆದರೆ ಇತರ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯ ಉತ್ಪನ್ನಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಂಭವನೀಯ ಅಡ್ಡ-ಮಾಲಿನ್ಯದ ಯಾವುದೇ ಚಿಹ್ನೆಗಳಿಲ್ಲ.BDDE ಮತ್ತು ಹೊಸ ಶಿಖರಗಳ LC-MS ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯ ನಂತರ ಪಡೆದ ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಮೌಲ್ಯಗಳನ್ನು ಕೋಷ್ಟಕ 2 ರಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ (ಮಾದರಿಗಳು 1-4) ಮತ್ತು ಚಿತ್ರ 4 ರಲ್ಲಿ ಅಯಾನ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಾಮ್.
ಗಮನಿಸಿ: 1-4 ಮಾದರಿಗಳು ಆಟೋಕ್ಲೇವ್ಡ್ BDDE ಕ್ರಾಸ್-ಲಿಂಕ್ಡ್ HA ಹೈಡ್ರೋಜೆಲ್‌ಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಲು ಬಳಸುವ ಕಚ್ಚಾ ವಸ್ತುಗಳಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿವೆ.ಈ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಆಟೋಕ್ಲೇವ್ ಮಾಡಲಾಗಿಲ್ಲ.
ಸಂಕ್ಷೇಪಣಗಳು: BDDE, 1,4-ಬ್ಯುಟಾನೆಡಿಯೋಲ್ ಡಿಗ್ಲೈಸಿಡಿಲ್ ಈಥರ್;HA, ಹೈಲುರಾನಿಕ್ ಆಮ್ಲ;LC-MS, ಲಿಕ್ವಿಡ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ ಮತ್ತು ಮಾಸ್ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಮೆಟ್ರಿ;MRM, ಬಹು ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಮೇಲ್ವಿಚಾರಣೆ.
ಚಿತ್ರ 4 HA ಮತ್ತು BDDE ಯ ಅಡ್ಡ-ಸಂಪರ್ಕ ಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಬಳಸಲಾದ ಕಚ್ಚಾ ವಸ್ತುಗಳ ಮಾದರಿಯ LC-MS ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಾಮ್‌ಗೆ ಅನುರೂಪವಾಗಿದೆ.
ಗಮನಿಸಿ: ಕ್ರಾಸ್-ಲಿಂಕಿಂಗ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಕೈಗೊಳ್ಳಲು ಬಳಸಲಾಗುವ ಅದೇ ಸಾಂದ್ರತೆ ಮತ್ತು ಅನುಪಾತದಲ್ಲಿ ಇವೆಲ್ಲವನ್ನೂ ಅಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ.ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಾಮ್‌ನಿಂದ ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾದ ಕಚ್ಚಾ ವಸ್ತುಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಗಳು ಇದಕ್ಕೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿವೆ: (1) ನೀರು, (2) 2% HA ಜಲೀಯ ದ್ರಾವಣ, (3) 1% NaOH ಜಲೀಯ ದ್ರಾವಣ.LC-MS ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು 203.30/129.10 Da (ಧನಾತ್ಮಕ MRM ಮೋಡ್‌ನಲ್ಲಿ) ಸಾಮೂಹಿಕ ಪರಿವರ್ತನೆಗಾಗಿ ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ.
ಸಂಕ್ಷೇಪಣಗಳು: BDDE, 1,4-ಬ್ಯುಟಾನೆಡಿಯೋಲ್ ಡಿಗ್ಲೈಸಿಡಿಲ್ ಈಥರ್;HA, ಹೈಲುರಾನಿಕ್ ಆಮ್ಲ;LC-MS, ಲಿಕ್ವಿಡ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ ಮತ್ತು ಮಾಸ್ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಮೆಟ್ರಿ;MRM, ಬಹು ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಮೇಲ್ವಿಚಾರಣೆ.
ಹೊಸ ಶಿಖರಗಳ ರಚನೆಗೆ ಕಾರಣವಾದ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲಾಯಿತು.ಕ್ರಾಸ್-ಲಿಂಕ್ಡ್ HA ಹೈಡ್ರೋಜೆಲ್ ಅನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಲು ಬಳಸುವ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳು BDDE ಕ್ರಾಸ್-ಲಿಂಕಿಂಗ್ ಏಜೆಂಟ್‌ನ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕತೆಯ ಮೇಲೆ ಹೇಗೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತವೆ ಎಂಬುದನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲು, ಹೊಸ ಶಿಖರಗಳ ರಚನೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ (ಸಾಧ್ಯವಾದ ಉಪ-ಉತ್ಪನ್ನಗಳು), ವಿಭಿನ್ನ ಅಳತೆಗಳನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು.ಈ ನಿರ್ಣಯಗಳಲ್ಲಿ, ನಾವು ಅಂತಿಮ BDDE ಕ್ರಾಸ್‌ಲಿಂಕರ್ ಅನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಿದ್ದೇವೆ ಮತ್ತು ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಿದ್ದೇವೆ, ಇದನ್ನು NaOH ನ ವಿವಿಧ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳೊಂದಿಗೆ (0%, 1%, 0.1%, ಮತ್ತು 0.01%) ಜಲೀಯ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡಲಾಯಿತು, ನಂತರ ಅಥವಾ ಆಟೋಕ್ಲೇವಿಂಗ್ ಇಲ್ಲದೆ.ಅದೇ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳನ್ನು ಅನುಕರಿಸುವ ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾದ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವು ಅಡ್ಡ-ಸಂಯೋಜಿತ HA ಹೈಡ್ರೋಜೆಲ್ ಅನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಲು ಬಳಸುವ ವಿಧಾನದಂತೆಯೇ ಇರುತ್ತದೆ."ವಸ್ತುಗಳು ಮತ್ತು ವಿಧಾನಗಳು" ವಿಭಾಗದಲ್ಲಿ ವಿವರಿಸಿದಂತೆ, ಮಾದರಿಯ ಸಾಮೂಹಿಕ ಪರಿವರ್ತನೆಯನ್ನು LC-MS ನಿಂದ 203.30/129.10 Da ಗೆ ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗಿದೆ.BDDE ಮತ್ತು ಹೊಸ ಶಿಖರದ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಕೋಷ್ಟಕ 3 ರಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ. ಪರಿಹಾರದಲ್ಲಿ NaOH ಇರುವಿಕೆಯನ್ನು ಲೆಕ್ಕಿಸದೆಯೇ ಸ್ವಯಂಕ್ಲೇವ್ ಮಾಡದ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ ಯಾವುದೇ ಹೊಸ ಶಿಖರಗಳು ಪತ್ತೆಯಾಗಿಲ್ಲ (ಮಾದರಿಗಳು 1-4, ಕೋಷ್ಟಕ 3)ಆಟೋಕ್ಲೇವ್ ಮಾಡಲಾದ ಮಾದರಿಗಳಿಗೆ, ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ NaOH ಉಪಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ ಮಾತ್ರ ಹೊಸ ಶಿಖರಗಳು ಪತ್ತೆಯಾಗುತ್ತವೆ, ಮತ್ತು ಶಿಖರದ ರಚನೆಯು ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿನ NaOH ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಮೇಲೆ ಅವಲಂಬಿತವಾಗಿರುತ್ತದೆ (ಮಾದರಿಗಳು 5-8, ಕೋಷ್ಟಕ 3) (RRT = 0.79).ಚಿತ್ರ 5 ಅಯಾನ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಾಮ್‌ನ ಉದಾಹರಣೆಯನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ, NAOH ನ ಉಪಸ್ಥಿತಿ ಅಥವಾ ಅನುಪಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ ಎರಡು ಆಟೋಕ್ಲೇವ್ಡ್ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ.
ಸಂಕ್ಷೇಪಣಗಳು: BDDE, 1,4-ಬ್ಯುಟಾನೆಡಿಯೋಲ್ ಡಿಗ್ಲೈಸಿಡಿಲ್ ಈಥರ್;LC-MS, ಲಿಕ್ವಿಡ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ ಮತ್ತು ಮಾಸ್ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಮೆಟ್ರಿ;MRM, ಬಹು ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಮೇಲ್ವಿಚಾರಣೆ.
ಗಮನಿಸಿ: ಟಾಪ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಾಮ್: ಮಾದರಿಯನ್ನು 0.1% NaOH ಜಲೀಯ ದ್ರಾವಣದೊಂದಿಗೆ ಸಂಸ್ಕರಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಆಟೋಕ್ಲೇವ್ಡ್ (20 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 120 ° C).ಬಾಟಮ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಾಮ್: ಮಾದರಿಯನ್ನು NaOH ನೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡಲಾಗಿಲ್ಲ, ಆದರೆ ಅದೇ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಆಟೋಕ್ಲೇವ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.203.30/129.10 Da (ಧನಾತ್ಮಕ MRM ಮೋಡ್‌ನಲ್ಲಿ) ಸಮೂಹ ಪರಿವರ್ತನೆಯನ್ನು LC-MS ಮೂಲಕ ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗಿದೆ.
ಸಂಕ್ಷೇಪಣಗಳು: BDDE, 1,4-ಬ್ಯುಟಾನೆಡಿಯೋಲ್ ಡಿಗ್ಲೈಸಿಡಿಲ್ ಈಥರ್;LC-MS, ಲಿಕ್ವಿಡ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ ಮತ್ತು ಮಾಸ್ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಮೆಟ್ರಿ;MRM, ಬಹು ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಮೇಲ್ವಿಚಾರಣೆ.
ಎಲ್ಲಾ ಆಟೋಕ್ಲೇವ್ ಮಾಡಲಾದ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ, NaOH ಜೊತೆಗೆ ಅಥವಾ ಇಲ್ಲದೆ, BDDE ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಬಹಳವಾಗಿ ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ (16.6 ಬಾರಿ) (ಮಾದರಿಗಳು 5-8, ಕೋಷ್ಟಕ 2).BDDE ಸಾಂದ್ರತೆಯಲ್ಲಿನ ಇಳಿಕೆಯು ಹೆಚ್ಚಿನ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ, 1,2-ಡಯೋಲ್ ಸಂಯುಕ್ತವನ್ನು ರೂಪಿಸಲು BDDE ಯ ಎಪಾಕ್ಸೈಡ್ ರಿಂಗ್ ಅನ್ನು ತೆರೆಯಲು ನೀರು ಬೇಸ್ (ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಫೈಲ್) ಆಗಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತದೆ.ಈ ಸಂಯುಕ್ತದ ಮೊನೊಐಸೋಟೋಪಿಕ್ ಗುಣಮಟ್ಟವು BDDE ಗಿಂತ ಭಿನ್ನವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಆದ್ದರಿಂದ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವುದಿಲ್ಲ.LC-MS 203.30/129.10 Da ನ ಸಾಮೂಹಿಕ ಶಿಫ್ಟ್ ಅನ್ನು ಪತ್ತೆ ಮಾಡಿದೆ.
ಅಂತಿಮವಾಗಿ, ಈ ಪ್ರಯೋಗಗಳು ಹೊಸ ಶಿಖರಗಳ ಪೀಳಿಗೆಯು BDDE, NAOH ಮತ್ತು ಆಟೋಕ್ಲೇವಿಂಗ್ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿರುತ್ತದೆ, ಆದರೆ HA ನೊಂದಿಗೆ ಯಾವುದೇ ಸಂಬಂಧವನ್ನು ಹೊಂದಿಲ್ಲ ಎಂದು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ.
ಸರಿಸುಮಾರು 2.71 ನಿಮಿಷಗಳ ಧಾರಣ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಕಂಡುಬಂದ ಹೊಸ ಶಿಖರವು ನಂತರ LC-MS ನಿಂದ ನಿರೂಪಿಸಲ್ಪಟ್ಟಿದೆ.ಈ ಉದ್ದೇಶಕ್ಕಾಗಿ, BDDE (9.9 mg/mL) ಅನ್ನು 1% NaOH ಜಲೀಯ ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ಕಾವು ಮತ್ತು ಆಟೋಕ್ಲೇವ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.ಕೋಷ್ಟಕ 4 ರಲ್ಲಿ, ಹೊಸ ಶಿಖರದ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ತಿಳಿದಿರುವ BDDE ಉಲ್ಲೇಖದ ಶಿಖರದೊಂದಿಗೆ ಹೋಲಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ (ಧಾರಣ ಸಮಯ ಸುಮಾರು 3.47 ನಿಮಿಷಗಳು).ಎರಡು ಶಿಖರಗಳ ಅಯಾನು ವಿಘಟನೆಯ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ, 2.72 ನಿಮಿಷಗಳ ಧಾರಣ ಸಮಯವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಶಿಖರವು BDDE ಶಿಖರದಂತೆಯೇ ಅದೇ ತುಣುಕುಗಳನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ, ಆದರೆ ವಿಭಿನ್ನ ತೀವ್ರತೆಗಳೊಂದಿಗೆ (ಚಿತ್ರ 6) ಎಂದು ತೀರ್ಮಾನಿಸಬಹುದು.2.72 ನಿಮಿಷಗಳ ಧಾರಣ ಸಮಯಕ್ಕೆ (PIS) ಅನುಗುಣವಾದ ಗರಿಷ್ಠಕ್ಕೆ, 147 Da ದ್ರವ್ಯರಾಶಿಯಲ್ಲಿ ವಿಘಟನೆಯ ನಂತರ ಹೆಚ್ಚು ತೀವ್ರವಾದ ಶಿಖರವನ್ನು ಗಮನಿಸಲಾಯಿತು.ಈ ನಿರ್ಣಯದಲ್ಲಿ ಬಳಸಲಾದ BDDE ಸಾಂದ್ರತೆಯಲ್ಲಿ (9.9 mg/mL), ನೇರಳಾತೀತ ವರ್ಣಪಟಲದಲ್ಲಿ ವಿಭಿನ್ನ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವ ವಿಧಾನಗಳು (UV, λ=200 nm) ವರ್ಣರೇಖನದ ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆಯ ನಂತರವೂ ಗಮನಿಸಲಾಗಿದೆ (ಚಿತ್ರ 7).2.71 ನಿಮಿಷಗಳ ಧಾರಣ ಸಮಯವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಶಿಖರವು ಇನ್ನೂ 200 nm ನಲ್ಲಿ ಗೋಚರಿಸುತ್ತದೆ, ಆದರೆ BDDE ಗರಿಷ್ಠವನ್ನು ಅದೇ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಾಮ್‌ನಲ್ಲಿ ವೀಕ್ಷಿಸಲಾಗುವುದಿಲ್ಲ.
ಕೋಷ್ಟಕ 4 ಸುಮಾರು 2.71 ನಿಮಿಷಗಳ ಧಾರಣ ಸಮಯದೊಂದಿಗೆ ಹೊಸ ಪೀಕ್‌ನ ಗುಣಲಕ್ಷಣ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಮತ್ತು 3.47 ನಿಮಿಷಗಳ ಧಾರಣ ಸಮಯದೊಂದಿಗೆ BDDE ಗರಿಷ್ಠ
ಗಮನಿಸಿ: ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಪಡೆಯಲು, ಎರಡು ಶಿಖರಗಳಲ್ಲಿ LC-MS ಮತ್ತು HPLC ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳನ್ನು (MRM ಮತ್ತು PIS) ನಡೆಸಲಾಯಿತು.HPLC ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಾಗಿ, 200 nm ತರಂಗಾಂತರದೊಂದಿಗೆ UV ಪತ್ತೆಯನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.
ಸಂಕ್ಷೇಪಣಗಳು: BDDE, 1,4-ಬ್ಯುಟಾನೆಡಿಯೋಲ್ ಡಿಗ್ಲೈಸಿಡಿಲ್ ಈಥರ್;HPLC, ಹೆಚ್ಚಿನ ಕಾರ್ಯಕ್ಷಮತೆಯ ಲಿಕ್ವಿಡ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ;LC-MS, ಲಿಕ್ವಿಡ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ ಮತ್ತು ಮಾಸ್ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಮೆಟ್ರಿ;MRM, ಬಹು ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಮೇಲ್ವಿಚಾರಣೆ;m/z, ಮಾಸ್-ಟು-ಚಾರ್ಜ್ ಅನುಪಾತ;PIS, ಉತ್ಪನ್ನ ಅಯಾನ್ ಸ್ಕ್ಯಾನಿಂಗ್;ನೇರಳಾತೀತ ಬೆಳಕು, ನೇರಳಾತೀತ ಬೆಳಕು.
ಗಮನಿಸಿ: ಸಾಮೂಹಿಕ ತುಣುಕುಗಳನ್ನು LC-MS ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ (PIS) ಮೂಲಕ ಪಡೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ.ಟಾಪ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಾಮ್: ಬಿಡಿಡಿಇ ಪ್ರಮಾಣಿತ ಮಾದರಿ ತುಣುಕುಗಳ ಸಮೂಹ ವರ್ಣಪಟಲ.ಬಾಟಮ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಾಮ್: ಪತ್ತೆಯಾದ ಹೊಸ ಶಿಖರದ ಮಾಸ್ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರಮ್ (BDDE ಪೀಕ್‌ಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ RRT 0.79 ಆಗಿದೆ).BDDE ಅನ್ನು 1% NaOH ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ಸಂಸ್ಕರಿಸಿ ಆಟೋಕ್ಲೇವ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.
ಸಂಕ್ಷೇಪಣಗಳು: BDDE, 1,4-ಬ್ಯುಟಾನೆಡಿಯೋಲ್ ಡಿಗ್ಲೈಸಿಡಿಲ್ ಈಥರ್;LC-MS, ಲಿಕ್ವಿಡ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ ಮತ್ತು ಮಾಸ್ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಮೆಟ್ರಿ;MRM, ಬಹು ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಮೇಲ್ವಿಚಾರಣೆ;PIS, ಉತ್ಪನ್ನ ಅಯಾನ್ ಸ್ಕ್ಯಾನ್;RRT, ಸಂಬಂಧಿತ ಧಾರಣ ಸಮಯ.
ಚಿತ್ರ 7 203.30 Da ಪೂರ್ವಗಾಮಿ ಅಯಾನ್‌ನ ಅಯಾನ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಾಮ್, ಮತ್ತು (A) 2.71 ನಿಮಿಷಗಳ ಧಾರಣ ಸಮಯದೊಂದಿಗೆ ಹೊಸ ಪೀಕ್ ಮತ್ತು (B) 200 nm ನಲ್ಲಿ 3.46 ನಿಮಿಷಗಳಲ್ಲಿ BDDE ಉಲ್ಲೇಖದ ಸ್ಟ್ಯಾಂಡರ್ಡ್ ಪೀಕ್‌ನ UV ಪತ್ತೆ.
ಉತ್ಪಾದಿಸಲಾದ ಎಲ್ಲಾ ಅಡ್ಡ-ಸಂಯೋಜಿತ HA ಹೈಡ್ರೋಜೆಲ್‌ಗಳಲ್ಲಿ, LC-MS ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣದ ನಂತರ ಉಳಿದಿರುವ BDDE ಸಾಂದ್ರತೆಯು <2 ppm ಎಂದು ಗಮನಿಸಲಾಗಿದೆ, ಆದರೆ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯಲ್ಲಿ ಹೊಸ ಅಜ್ಞಾತ ಶಿಖರವು ಕಾಣಿಸಿಕೊಂಡಿತು.ಈ ಹೊಸ ಶಿಖರವು BDDE ಪ್ರಮಾಣಿತ ಉತ್ಪನ್ನಕ್ಕೆ ಹೊಂದಿಕೆಯಾಗುವುದಿಲ್ಲ.BDDE ಪ್ರಮಾಣಿತ ಉತ್ಪನ್ನವು ಧನಾತ್ಮಕ MRM ಮೋಡ್‌ನಲ್ಲಿ ಅದೇ ಗುಣಮಟ್ಟದ ಪರಿವರ್ತನೆ (MRM ಪರಿವರ್ತನೆ 203.30/129.10 Da) ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗೆ ಒಳಗಾಗಿದೆ.ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ, ಹೈಡ್ರೋಜೆಲ್‌ಗಳಲ್ಲಿ BDDE ಅನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿಯಂತಹ ಇತರ ವಿಶ್ಲೇಷಣಾತ್ಮಕ ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಮಿತಿ ಪರೀಕ್ಷೆಗಳಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಆದರೆ ಗರಿಷ್ಠ ಪತ್ತೆ ಮಿತಿ (LOD) 2 ppm ಗಿಂತ ಸ್ವಲ್ಪ ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ.ಮತ್ತೊಂದೆಡೆ, ಇಲ್ಲಿಯವರೆಗೆ, ಕ್ರಾಸ್-ಲಿಂಕ್ಡ್ HA ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ಸಕ್ಕರೆ ಘಟಕದ ತುಣುಕುಗಳಲ್ಲಿ HA ನ ಕ್ರಾಸ್-ಲಿಂಕಿಂಗ್ ಮತ್ತು/ಅಥವಾ ಮಾರ್ಪಾಡುಗಳ ಮಟ್ಟವನ್ನು ನಿರೂಪಿಸಲು NMR ಮತ್ತು MS ಅನ್ನು ಬಳಸಲಾಗಿದೆ.ಈ ತಂತ್ರಗಳ ಉದ್ದೇಶವು ಈ ಲೇಖನದಲ್ಲಿ ನಾವು ವಿವರಿಸಿದಂತೆ (ನಮ್ಮ LC-MS ವಿಧಾನದ LOD = 10 ppb) ಅಂತಹ ಕಡಿಮೆ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಲ್ಲಿ ಉಳಿದಿರುವ BDDE ಪತ್ತೆಯನ್ನು ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸುವುದು ಎಂದಿಗೂ ಆಗಿರಲಿಲ್ಲ.